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BIOCHANNEL 培養(yǎng)建議 | 人胚腎細(xì)胞

HEK-293A 人胚腎細(xì)胞

293A細(xì)胞是眾多293細(xì)胞系列的一個(gè)亞克隆，因其具有相對(duì)扁平的形態(tài)和良好的貼壁能力而得名（A是adhesion首字母）。該細(xì)胞含有一個(gè)穩(wěn)定整合的E1基因拷貝，能夠提供生成重組腺病毒所需的E1蛋白（包括E1a和E1b蛋白），故它常被用于腺病毒的初始生產(chǎn)、擴(kuò)增和滴定。在培養(yǎng)過程中，該細(xì)胞呈現(xiàn)單層的扁平形態(tài)，沒有明顯的細(xì)胞重疊和細(xì)胞空隙（hole），這使得病毒滴定和空斑測(cè)定（plaque assay）更為容易。

293FT 人胚腎細(xì)胞

該細(xì)胞來源于用 SV40 大T抗原轉(zhuǎn)化的人胚胎腎細(xì)胞 293F（F是 Fast-growth 的首字母），是一種快速生長(zhǎng)、高度可轉(zhuǎn)染的克隆分離株。它是制備 高滴度慢病毒的良好宿主，能夠穩(wěn)定表達(dá) pCMVSPORT6TAg.neo 質(zhì)粒中的 SV40 大T抗原，且大 T 抗原的表達(dá)受到人類巨細(xì)胞病毒（CMV）啟動(dòng)子的控制，表 達(dá)水平較高。此外，該細(xì)胞還可穩(wěn)定表達(dá)新霉素抗性基因，且新霉素抗性基因的 表達(dá)受到 SV40 增強(qiáng)子/啟動(dòng)子的控制，因此可用含有 0.5 mg/ml G418 的培養(yǎng)基 中維持培養(yǎng)。

HEK-293T 人胚腎細(xì)胞

HEK-293T細(xì)胞是293T（293tsA1609neo）細(xì)胞系（ATCC CRL-11268）的衍生物。細(xì)胞持續(xù)表達(dá)SV40抗原，該細(xì)胞常用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，轉(zhuǎn)染效率較高。（轉(zhuǎn)染一般以50%密度鋪板，待細(xì)胞剛剛貼到皿壁上后（一般8-10小時(shí)），即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作）

HEK-293 人胚腎細(xì)胞

 

盡管較早的報(bào)道說這株細(xì)胞包含腺病毒5 DNA病毒基因組的左端和右端，現(xiàn)在已經(jīng)清楚只存在左端序列。這株細(xì)胞適于滴定人腺病毒。細(xì)胞表達(dá)一種不尋常的由整聯(lián)蛋白beta-1亞基和玻聯(lián)蛋白alpha-v亞基組成的玻聯(lián)蛋白細(xì)胞表面受體。Ad5插入片段進(jìn)行了克隆和測(cè)序，結(jié)果表明堿基1-4344插入到了19號(hào)染色體（19q13.2）

培養(yǎng)建議

細(xì)胞生長(zhǎng)快，通常倍增時(shí)間不到16~24h，每2-3天1:4~1:6傳代，細(xì)胞融合度達(dá)到80%即可傳代。

細(xì)胞貼壁不牢，胰酶消化時(shí)間室溫15~30秒；吹打動(dòng)作盡量輕柔，避免出現(xiàn)過多氣泡

需要注意的是，血清批間差容易導(dǎo)致293T細(xì)胞的狀態(tài)差異，盡可能選擇穩(wěn)定優(yōu)質(zhì)的同批次血清。為避免運(yùn)輸過程中震蕩導(dǎo)致293T細(xì)胞漂浮，產(chǎn)品出庫(kù)時(shí)放低了細(xì)胞密度，若收到貨后細(xì)胞密度較低，建議當(dāng)天倒掉灌裝培養(yǎng)基或離心收集細(xì)胞，更換新鮮的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞密度90%以上再傳代。

細(xì)胞傳代處理后的第二天，在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，如死細(xì)胞較多且細(xì)胞密度較低，需要進(jìn)行換液操作，也可視情況穩(wěn)定。

該細(xì)胞貼壁能力較弱，細(xì)胞生長(zhǎng)不能過密，過密細(xì)胞容易脫落，脫落下來的細(xì)胞可以通過離心收集，繼續(xù)培養(yǎng)。