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BIOCHANNEL 培養建議 | 人胚腎細胞

HEK-293A 人胚腎細胞

293A細胞是眾多293細胞系列的一個(gè)亞克隆,因其具有相對扁平的形態(tài)和良好的貼壁能力而得名(A是adhesion首字母)。該細胞含有一個(gè)穩定整合的E1基因拷貝,能夠提供生成重組腺病毒所需的E1蛋白(包括E1a和E1b蛋白),故它常被用于腺病毒的初始生產(chǎn)、擴增和滴定。在培養過(guò)程中,該細胞呈現單層的扁平形態(tài),沒(méi)有明顯的細胞重疊和細胞空隙(hole),這使得病毒滴定和空斑測定(plaque assay)更為容易。

293FT 人胚腎細胞

該細胞來(lái)源于用 SV40 大T抗原轉化的人胚胎腎細胞 293F(F是 Fast-growth 的首字母),是一種快速生長(cháng)、高度可轉染的克隆分離株。它是制備 高滴度慢病毒的良好宿主,能夠穩定表達 pCMVSPORT6TAg.neo 質(zhì)粒中的 SV40 大T抗原,且大 T 抗原的表達受到人類(lèi)巨細胞病毒(CMV)啟動(dòng)子的控制,表 達水平較高。此外,該細胞還可穩定表達新霉素抗性基因,且新霉素抗性基因的 表達受到 SV40 增強子/啟動(dòng)子的控制,因此可用含有 0.5 mg/ml G418 的培養基 中維持培養。

HEK-293T 人胚腎細胞

HEK-293T細胞是293T(293tsA1609neo)細胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。細胞持續表達SV40抗原,該細胞常用于轉染實(shí)驗,轉染效率較高。(轉染一般以50%密度鋪板,待細胞剛剛貼到皿壁上后(一般8-10小時(shí)),即可進(jìn)行轉染操作)

HEK-293 人胚腎細胞

 

盡管較早的報道說(shuō)這株細胞包含腺病毒5 DNA病毒基因組的左端和右端,現在已經(jīng)清楚只存在左端序列。這株細胞適于滴定人腺病毒。細胞表達一種不尋常的由整聯(lián)蛋白beta-1亞基和玻聯(lián)蛋白alpha-v亞基組成的玻聯(lián)蛋白細胞表面受體。Ad5插入片段進(jìn)行了克隆和測序,結果表明堿基1-4344插入到了19號染色體(19q13.2)

培養建議

細胞生長(cháng)快,通常倍增時(shí)間不到16~24h,每2-3天1:4~1:6傳代,細胞融合度達到80%即可傳代。

細胞貼壁不牢,胰酶消化時(shí)間室溫15~30秒;吹打動(dòng)作盡量輕柔,避免出現過(guò)多氣泡

需要注意的是,血清批間差容易導致293T細胞的狀態(tài)差異,盡可能選擇穩定優(yōu)質(zhì)的同批次血清。為避免運輸過(guò)程中震蕩導致293T細胞漂浮,產(chǎn)品出庫時(shí)放低了細胞密度,若收到貨后細胞密度較低,建議當天倒掉灌裝培養基或離心收集細胞,更換新鮮的完全培養基培養至細胞密度90%以上再傳代。

細胞傳代處理后的第二天,在顯微鏡下觀(guān)察細胞狀態(tài),如死細胞較多且細胞密度較低,需要進(jìn)行換液操作,也可視情況穩定。

該細胞貼壁能力較弱,細胞生長(cháng)不能過(guò)密,過(guò)密細胞容易脫落,脫落下來(lái)的細胞可以通過(guò)離心收集,繼續培養。



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