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原代細胞與細胞系的培養區別

首先我們需要區分原代細胞和細胞系的概念:

原代細胞(primary cell)是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細胞并在體外進(jìn)行模擬機體培養的細胞。

細胞系(cell line)是原代細胞經(jīng)首次傳代成功后即為細胞系。其中能夠連續傳代的細胞叫做連續細胞系或無(wú)限細胞系,不能連續培養的稱(chēng)為有限細胞系。人類(lèi)腫瘤細胞,在體外培養半年以上,生長(cháng)穩定,并連續傳代的即可稱(chēng)為連續性株或系。

原代細胞培養之組織取材

原代細胞最接近和最能反映體內生長(cháng)特性,適宜用于藥物敏感性試驗、細胞分化等實(shí)驗研究。

部位

方法

 皮膚和黏膜

主要取皮片,面積一般2-4cm2


內臟和實(shí)體瘤

? 無(wú)菌環(huán)境;

? 熟悉所需組織的類(lèi)型和部位;

? 要避開(kāi)破潰、壞死、液化部分,以防污染、盡量去除混雜的結締組織。


血液細胞

? 一般多抽取靜脈外周血、或從淋巴組織中分離細胞;

? 取材時(shí)應注意抗凝。

骨髓、羊水、胸/腹水細胞


嚴格無(wú)菌、注意抗凝、還要盡快分離培養、離心后,用無(wú)鈣、鎂PBS洗兩次,再用培養液洗一次后即可培養,不宜低溫存放。



動(dòng)物組織取材-鼠胚組織

? 用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動(dòng)物;

? 將其浸泡在含75%酒精的燒杯中,5分鐘后取出動(dòng)物;

? 在消毒過(guò)得木板上可用無(wú)菌的圖釘固定四肢,切開(kāi)皮膚;

? 用無(wú)菌操作法解剖取胚。

動(dòng)物組織取材-幼鼠胚腎/肺


? 幼鼠采用上述方法處死消毒后;

? 腹部朝上固定在木板上,先切開(kāi)游離毛皮并拉開(kāi)至兩側;

? 采用無(wú)菌法打開(kāi)胸腔取肺,或從背部打開(kāi)腹腔取腎。

原代細胞的培養方法

組織塊培養法:

將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著(zhù)于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長(cháng)。

消化培養法:

該方法是源于消化分散法,將妨礙細胞生長(cháng)的細胞間質(zhì)(包括基質(zhì)、纖維等)去除,使細胞分散形成細胞懸液,然后分瓶培養。

懸浮細胞培養法:

對于懸浮生長(cháng)的細胞,如淋巴細胞、骨髓細胞、和免疫細胞等無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養。

器官培養:

從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養,其特性仍保持原有器官細胞的組織結構和聯(lián)系、并能存活。

注意事項:

注意事項

1. 培養液和培養物的比例:一定濃度的培養物僅能支持一定數量的細胞生長(cháng),不能盲目增加每單位體積的細胞濃度。

2. pH:初培養pH應為7.4,培養過(guò)程中應不低于7.0。

3. 培養瓶?jì)鹊目臻g:一般培養瓶?jì)扰囵B液與液面上的空間體積之比為1:10。

細胞系培養

細胞系常見(jiàn)生長(cháng)方式分為貼壁細胞和懸浮細胞

貼壁細胞

懸浮細胞

適合包括原代細胞在內的大多數細胞類(lèi)型。

適用于已適應懸浮培養的細胞和其他一些無(wú)粘附性的細胞。

需要定期傳代,但易于在倒置顯微鏡下進(jìn)行目視檢驗。

較易傳代,但需要每天進(jìn)行細胞計數和存活率測定,以遵循生長(cháng)方式;可將培養物稀釋以刺激生長(cháng)。

采用酶法或機械方法解離細胞。

無(wú)需通過(guò)酶法或機械方法解離細胞

細胞生長(cháng)受到表面積限制,從而可能限制細胞產(chǎn)量。

細胞生長(cháng)受到培養基中細胞濃度的限制,易于擴大規模培養

需要使用經(jīng)過(guò)組織培養處理的容器。

可在未經(jīng)組織培養處理的培養容器中進(jìn)行培養,但需要攪動(dòng)以便進(jìn)行充分的氣體交換

可連續收獲產(chǎn)物,用于細胞學(xué)研究等多種研究應用

可批量收獲產(chǎn)物,用于批量生產(chǎn)等多種研究應用

懸浮細胞傳代步驟

直接傳代法

1、待懸浮細胞長(cháng)滿(mǎn)至80%~90%(細胞懸液變黃),即可傳代;

2、用吸管吸棄細胞懸液 1 /2~1 / 3;

3、加入適量的新鮮培養基,繼續培養。

離心傳代法(在發(fā)現有細胞碎片的情況下)

1、將細胞懸液轉移到離心管內;

2、150 g 離心 5 min,棄去上層清液;

3、使用新鮮的培養基重懸細胞;吸管吸取適量細胞懸液,裝入新的培養瓶,      再加入適量的新鮮培養基,繼續培養。

貼壁細胞傳代步驟

清洗—消化—終止—標記




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